绵羊红细胞单克隆抗体（sRBC-McAb）

一、制备原理与方法

1. 基本原理

• 抗原免疫：用 sRBC 免疫小鼠（如 BALB/c 小鼠），刺激脾细胞产生针对 sRBC 表面抗原（如血型抗原、膜蛋白等）的特异性 B 淋巴细胞。

• 细胞融合：将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。

• 筛选与克隆化：通过有限稀释法筛选出能稳定分泌抗 sRBC 抗体的杂交瘤细胞克隆，经克隆化培养后获得单克隆抗体。

2. 关键步骤

• 免疫程序：通常需多次腹腔注射 sRBC（如初次免疫 + 加强免疫），末次免疫后 3-5 天取脾细胞。

• 融合剂：常用聚乙二醇（PEG）或电融合法促进细胞融合。

• 筛选系统：采用 HAT 培养基（含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）筛选杂交瘤细胞（骨髓瘤细胞因缺乏 HGPRT 酶无法存活，脾细胞自然死亡，仅杂交瘤细胞存活）。

• 抗体检测：通过间接 ELISA 或流式细胞术检测杂交瘤细胞培养上清中的抗 sRBC 抗体活性。

二、sRBC-McAb 的特性

1. 抗原特异性

• 识别 sRBC 表面特定抗原表位（如 α- 半乳糖苷抗原、血型糖蛋白等），不同克隆的 McAb 可能针对不同表位。

• 示例：某 sRBC-McAb 可能特异性结合 sRBC 膜上的Band 3 蛋白（一种跨膜阴离子转运蛋白），而另一克隆可能靶向Rh 血型相关抗原。

2. 免疫学特性

• 抗体类型：多为 IgG 类（取决于免疫小鼠的 B 细胞分化类型），可通过亚型鉴定试剂盒确定（如 IgG1、IgG2a 等）。

• 亲和力：单克隆抗体的亲和力通常高于多克隆抗体，且批次间一致性高。

3. 理化特性

• 可通过 Protein A/G 层析纯化，纯度可达 95% 以上，适用于体内外实验。

三、主要应用场景

1. 免疫学基础研究

• 抗体介导的细胞杀伤：用于研究补体依赖的细胞毒作用（CDC）或抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）。例如，sRBC-McAb 与补体结合后可导致 sRBC 裂解，用于补体活性检测。

• B 细胞应答机制：作为模型抗体研究 B 细胞活化、抗体类别转换等过程。

2. 实验动物模型

• 溶血实验：评估 sRBC-McAb 的溶血能力，用于药物毒性或免疫复合物疾病模型（如自身免疫性溶血性贫血）。

• 被动免疫模型：通过注射 sRBC-McAb 诱导小鼠产生短暂的特异性抗体，研究体液免疫应答动力学。

3. 生物技术与诊断

• 流式细胞术：标记荧光素（如 FITC、PE）后，用于分选或鉴定表达 sRBC 抗原的细胞（如杂交瘤细胞或转基因细胞）。

• 免疫检测试剂：作为标准品用于定量检测抗 sRBC 抗体的效价（如间接 ELISA 中的阳性对照）。

4. 教学与科研工具

• 在免疫学实验教学中，常用于演示抗体的制备流程、抗原 - 抗体反应原理（如凝集实验、溶血实验）。

四、典型研究案例

1. 补体活性检测（CH50 实验）

• 原理：sRBC 与相应 McAb 结合后激活补体级联反应，导致 sRBC 裂解，通过测定 50% 溶血所需的补体浓度（CH50 值）评估血清补体总活性。

• 应用：用于自身免疫病（如系统性红斑狼疮）或免疫缺陷病的补体功能检测。

2. 抗独特型抗体研究

• sRBC-McAb 的可变区（Idiotope）可作为抗原，诱导产生抗独特型抗体（Anti-Id），用于研究抗体的免疫调节网络（如 Jerne 网络学说）。

五、注意事项与局限性

1. 交叉反应性

• sRBC 表面抗原可能与其他物种红细胞（如人、小鼠红细胞）存在同源性，需验证 McAb 的种属特异性。

2. 表位依赖性

• 不同克隆的 sRBC-McAb 可能识别 sRBC 的不同表位，实验中需明确所用克隆的表位特征（如线性表位或构象表位）。

3. 体内应用的安全性

• 若用于动物体内实验，需注意 McAb 的种属来源（如小鼠源性 McAb 可能在体内引发抗小鼠抗体反应，需人源化改造）。