淋球菌抗原；NGH-Ag         

一、淋球菌抗原的主要类型

1. 表面抗原

• 脂寡糖（LOS）

• 类似脂多糖（LPS），但缺乏 O 抗原重复多糖链，具有强免疫原性，可诱导炎症反应（如尿道炎、盆腔炎）。

• 特点：LOS 抗原变异率高，不同菌株间存在差异，是淋球菌逃避免疫清除的机制之一。

• 外膜蛋白（OMPs）

• OMPⅠ（Por 蛋白）：分为 PorA 和 PorB 亚型，构成菌膜孔道，抗原性稳定，是疫苗研发的重要靶点。

• OMPⅡ（Tbp 蛋白）：与铁离子获取相关，抗原性可变，参与细菌黏附宿主细胞。

• OMPⅢ（Rmp 蛋白）：免疫原性弱，但可诱导产生非保护性抗体，可能干扰其他抗原的免疫应答。

• 菌毛蛋白（Pilin）

• 由 pil 基因编码，介导淋球菌对尿道黏膜的黏附，抗原性高度可变（因 pil 基因重组频繁），导致淋球菌易重复感染。

2. 可溶性抗原

• IgA1 蛋白酶

• 淋球菌分泌的蛋白酶，可降解宿主黏膜表面的 IgA1 抗体，破坏局部免疫防御，其抗原性可用于检测感染后产生的特异性抗体。

• 核糖体蛋白

• 存在于细菌裂解物中，免疫原性较弱，主要用于研究细菌代谢活动。

二、淋球菌抗原在检测中的应用

1. 直接凝集试验

• 原理：将淋球菌菌体抗原（含 LOS 和 OMPs）与待检标本混合，若存在抗体则形成肉眼可见的凝集颗粒。

• 试剂：市售淋球菌诊断血清（含抗 LOS 抗体）。

• 应用场景：用于疑似淋病患者标本的快速初筛，需结合镜检（革兰阴性双球菌）提高可靠性。

• 局限性：灵敏度约 70%~85%，特异度受标本污染（如其他奈瑟菌）影响较大。

2. 免疫层析法（胶体金法）

• 检测对象：标本中的淋球菌抗原（如 LOS 或 OMPⅠ）。

• 操作流程：

1. 将标本处理液滴加至检测卡加样孔，抗原随液体迁移。

2. 若含淋球菌抗原，可与胶体金标记的单克隆抗体（抗 LOS 或抗 PorA）结合，在检测线形成肉眼可见条带。

• 优点：操作简便（15~20 分钟出结果）、无需仪器，适合基层医疗单位。

• 缺点：灵敏度低于核酸检测（约 80%~90%），对低载量感染易漏检。

3. ELISA 法

• 抗原类型：纯化的 LOS 或重组 OMPⅠ 抗原（如 PorA 蛋白）。

• 检测指标：

• 双抗体夹心法：检测标本中的淋球菌抗原（适用于急性期感染）。

• 间接法：检测血清中抗淋球菌抗体（适用于流行病学调查，但无法区分现症与既往感染）。

• 优点：自动化程度高、特异度可达 95% 以上，可通过标准曲线定量抗原含量。

4. 协同凝集试验

• 原理：利用葡萄球菌 A 蛋白（SPA）能结合 IgG Fc 段的特性，将抗淋球菌抗体（IgG）吸附于葡萄球菌表面，制成 “诊断菌液”。若标本含淋球菌抗原，可与诊断菌液发生凝集。

• 应用：曾用于临床标本检测，但因操作繁琐已逐渐被免疫层析法取代。

三、淋球菌抗原的质控要点

1. 抗原制备质控

• 菌株标准化

• 使用国际标准菌株（如 ATCC 49226、FA1090），通过生化鉴定（氧化酶阳性、分解葡萄糖不分解麦芽糖 / 蔗糖）和血清凝集试验确认抗原特性。

• 提取工艺优化

• LOS 提取：采用酚 - 水法或酶解法，避免高温破坏抗原表位，用PAGE 电泳验证寡糖链分子量分布。

• 重组抗原表达：如重组 PorA 蛋白需通过镍柱纯化，并用Western blot验证其与淋球菌阳性血清的反应性。

2. 抗原保存质控

• 保存条件

• 菌体抗原：混悬于含 0.05% 叠氮化钠的 PBS 中，4℃保存（有效期≤3 个月），避免反复冻融导致外膜蛋白脱落。

• 重组抗原：冻干后 - 20℃保存，或溶于含 5% BSA 的 PBS 中 - 80℃保存，使用前需通过 ELISA 验证活性（包被后 OD 值≥1.2）。

• 稳定性监测

• 每批次抗原需标注制备日期、效价（如凝集效价≥1:2560），每 2 个月用标准阳性血清进行效价复核，效价下降≥30% 时需重新制备。

3. 检测应用质控

• 阴阳性对照设置

• 阳性对照：已知浓度的淋球菌抗原标准品或阳性菌株裂解物。

• 阴性对照：无菌生理盐水或淋球菌阴性标本（如正常人尿道拭子提取物）。

• 每次检测需包含：

• 若阳性对照无反应或阴性对照出现假阳性，需排查抗原降解或试剂污染。

• 交叉反应控制

• 使用型特异性单克隆抗体（如针对 PorA VR1 可变区的抗体），区分淋球菌与脑膜炎奈瑟菌。

• 联合检测菌毛抗原：淋球菌菌毛蛋白（Pilin）与脑膜炎奈瑟菌无交叉反应。

• 淋球菌与脑膜炎奈瑟菌（Nm）共享部分 OMP 抗原（如 Rmp 蛋白），可通过以下方法降低干扰：