布氏杆菌抗原；Brucella-Ag             

布氏杆菌抗原（Brucella-Ag）是指布氏杆菌属细菌表面或体内具有免疫原性的物质，可刺激机体产生特异性免疫应答，常用于布氏杆菌病（布鲁氏菌病，简称 “布病”）的血清学诊断、疫苗研发及免疫机制研究。以下从抗原类型、检测应用、质控要点及注意事项等方面详细说明：

一、布氏杆菌抗原的主要类型

布氏杆菌属包含多种菌种（如羊种、牛种、猪种布氏杆菌），其抗原成分复杂，主要分为以下几类：

1. 菌体抗原（结构抗原）

脂多糖（LPS/O 抗原）

是布氏杆菌的主要表面抗原，具有种属特异性，其中A（牛种特异性）和M（羊种特异性）抗原是鉴别菌种的关键：

牛种布氏杆菌：A 抗原为主（A:M=20:1）。

羊种布氏杆菌：M 抗原为主（M:A=20:1）。

猪种布氏杆菌：A:M=2:1，并含独特的 R 抗原（粗糙型抗原）。

应用：用于血清学凝集试验（如虎红平板试验、试管凝集试验），检测患者血清中的抗 O 抗体。

外膜蛋白（OMPs）

包括 OMP2、OMP31、OMP16 等，具有免疫原性和毒力相关性，其中 OMP2 是诊断和疫苗研发的重要靶点。

应用：ELISA 试剂盒中常用重组 OMP2 抗原检测特异性 IgG/IgM 抗体，可区分急慢性感染。

2. 分泌型抗原

核糖体蛋白

如 16S rRNA 相关蛋白，存在于细菌生长过程中释放的分泌物中，可诱导细胞免疫。

代谢抗原

细菌代谢产物中的蛋白质或多糖，用于皮内试验（如布氏杆菌水解素试验）辅助诊断慢性感染。

3. 重组抗原

通过基因工程技术表达的布氏杆菌特异性蛋白（如 rOMP2、rL7/L12），具有纯度高、批间一致性好的优点，广泛用于现代血清学检测（如化学发光法）。

二、布氏杆菌抗原在检测中的应用

布氏杆菌抗原主要用于布病的实验室诊断，常见方法及原理如下：

1. 凝集试验（经典方法）

虎红平板试验（RBPT）

抗原：用酸性虎红染色的布氏杆菌菌体抗原（含 LPS）。

原理：在酸性条件下，抗原与血清中抗体结合形成可见凝集颗粒，适用于现场快速筛查。

特点：灵敏度高（约 95%），但特异度较低（可能与其他革兰阴性菌交叉反应）。

试管凝集试验（SAT）

抗原：标准化的布氏杆菌菌体抗原（经甲醛灭活）。

原理：倍比稀释患者血清后与抗原混合，观察凝集效价，效价≥1:100（++）为阳性。

特点：为布病诊断的 “金标准” 之一，可半定量检测抗体，但需耗时 18~24 小时。

2. ELISA 法

抗原类型：纯化 LPS、重组 OMP2 或 OMP31 抗原。

检测指标：

IgM：急性期感染标志物（发病 1~2 周后升高）。

IgG：慢性感染或既往感染标志物（可持续数年）。

优点：自动化程度高、特异度提升（可达 90% 以上），可通过 cut-off 值排除非特异性反应。

3. 其他检测方法

皮内试验

抗原：布氏杆菌水解素（含分泌型抗原）。

原理：皮内注射后观察红肿硬结，用于流行病学筛查或辅助诊断慢性布病（但无法区分现症与既往感染）。

分子生物学对照

部分实验室用布氏杆菌 DNA 作为 “核酸抗原” 对照，验证血清学检测的特异性（如排除 PCR 假阳性）。

三、布氏杆菌抗原的质控要点

为确保检测结果准确，需对布氏杆菌抗原的制备、保存及使用进行严格质量控制：

1. 抗原制备质控

菌株标准化

使用国际标准菌株（如牛种布氏杆菌 544A、羊种布氏杆菌 16M），定期通过生化鉴定（如 CO₂需求、硫化氢产生）和血清凝集试验确认抗原特性。

提取工艺优化

LPS 提取：采用温和的酚 - 水法，避免高温破坏 A/M 抗原表位，并用PAGE 电泳验证多糖分子量分布。

重组抗原表达：通过 IPTG 诱导表达后，利用镍柱亲和层析纯化，用Western blot验证蛋白特异性（与布氏杆菌阳性血清反应）。