伤寒抗原质控   SH-Ag

伤寒抗原质控是指对伤寒沙门氏菌相关抗原（如 O 抗原、H 抗原、Vi 抗原）的制备、保存及应用过程进行质量控制，以确保其在血清学检测（如肥达试验）、疫苗生产、科学研究等场景中的准确性、稳定性和可靠性。以下从质控目标、关键环节、常见问题及应对措施等方面详细说明：

一、质控目标

抗原纯度：确保抗原成分单一（如纯化的 Vi 多糖、O 抗原脂多糖），避免杂蛋白或其他微生物抗原污染。

抗原活性：维持抗原免疫原性（如与抗体特异性结合的能力），避免因降解或变性导致检测结果偏差。

批间一致性：不同批次生产的抗原需保证性能一致（如抗体结合效价、电泳图谱等）。

安全性：用于疫苗或诊断试剂的抗原需灭活彻底，无残留毒性或感染性。

二、质控关键环节

1. 抗原制备阶段

（1）细菌培养与抗原提取

菌株选择

使用标准菌株（如伤寒沙门氏菌 ATCC 9017），定期通过血清凝集试验（与标准抗血清反应）和生化鉴定（如糖发酵试验）确认菌株抗原特性。

示例：Vi 抗原阳性菌株需通过 Vi 噬菌体裂解试验验证其抗原表达能力。

培养条件控制

O 抗原（LPS）：需在富含镁离子的培养基中培养，促进 LPS 完整表达；避免高温或酸碱环境破坏多糖结构。

Vi 抗原：部分菌株需在高渗或血清培养基中诱导表达，培养时间需严格优化（如 18~24 小时对数生长期）。

抗原提取方法

O 抗原（LPS）：通过热酚水法或酶解法提取，需用鲎试剂法检测内毒素活性，并通过 ** 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）** 验证多糖分子量分布。

Vi 抗原：采用温和的水相提取法（如超速离心），避免强酸 / 碱破坏多糖结构，并用酚 - 硫酸法测定多糖含量。

（2）纯化与灭活

纯化工艺

采用层析法（如 DEAE 纤维素层析、亲和层析）去除杂蛋白和核酸，通过蛋白定量试剂盒（如 BCA 法）确认蛋白残留量（应低于 0.1%）。

灭活处理

用于诊断试剂的抗原需经甲醛或加热灭活，通过细菌培养法验证灭活彻底性（接种血平板培养 48 小时无细菌生长）。

疫苗用抗原需额外通过动物安全性试验（如小鼠腹腔注射，观察 7 天无异常反应）。

2. 抗原保存与运输

保存条件

冻干抗原：置于 - 20℃或更低温度，避免反复冻融（可导致抗原聚集或降解）。

液体抗原：加入防腐剂（如 0.05% 叠氮化钠），4℃保存，避免长期室温放置（Vi 多糖在 pH<6 或> 8 时易水解）。

运输要求

冷链运输（2~8℃），使用保温箱或干冰，避免高温导致抗原变性。

运输前后需检查包装完整性，冻干粉若出现潮解需废弃。