毒死蜱单克隆抗体；毒死蜱抗体；Chlorpyrifos（CPF）抗体；毒死蜱抗原；毒死蜱偶联抗原

英文名称：Chlorpyrifos（CPF）

毒死蜱抗原的相关介绍：

基本信息

定义：毒死蜱抗原通常是指将毒死蜱半抗原与载体蛋白偶联后得到的人工抗原，用于制备针对毒死蜱的抗体，进而应用于毒死蜱的免疫检测等领域。

相关背景：毒死蜱是一种广泛应用于农业生产的广谱型有机磷酸酯类杀虫剂，可通过多种途径进入人体，对健康造成潜在威胁。为实现对环境及农产品中毒死蜱残留的快速、灵敏检测，免疫分析技术应运而生，而毒死蜱抗原的制备是该技术的关键环节。

制备方法

半抗原的合成

原料选择：一般选用毒死蜱原药作为起始原料，同时选择含有可反应活性基团的化合物作为连接臂，如 3 - 巯基bing酸等。

反应条件：在碱性条件下进行反应，如使用氢yang化钠等碱性物质调节反应体系的 pH 值135。

反应过程：毒死蜱与连接臂化合物发生化学反应，在毒死蜱分子上引入连接臂，形成毒死蜱半抗原。例如，毒死蜱与 3 - 巯基bing酸反应，可得到 O,O - 二乙基 - O-（3,5 - 二氯 - 6-（2 - 羧乙基）硫代 - 2 - 吡啶基）硫代磷酸酯半抗原。

全抗原的制备

载体蛋白选择：常用的载体蛋白有牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）、人血清白蛋白、乳铁蛋白、血蓝蛋白等。

偶联方法：主要有碳二亚胺法、混合酸酐法、活泼酯法等。以活泼酯法为例，将毒死蜱半抗原与 N - 羟基琥珀亚胺（NHS）和二环己基碳二亚胺（DCC）等试剂反应，生成活泼酯中间体，再与载体蛋白上的氨基发生反应，

通过酰胺键将半抗原与载体蛋白偶联，形成毒死蜱全抗原。

毒死蜱单克隆抗体的详细介绍：

基本概念

毒死蜱单克隆抗体是由单一的 B 淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的，只作用于毒死蜱这一特定抗原决定簇的高度均一、高度特异性的抗体。

制备过程

免疫动物：通常选用 Balb/c 小鼠等实验动物，将毒死蜱抗原与弗氏佐剂混合后，通过皮下、腹腔等途径注射到小鼠体内，进行多次免疫，使小鼠免疫系统产生针对毒死蜱的 B 淋巴细胞。

细胞融合：取免疫后的小鼠脾脏细胞（其中含有产生抗体的 B 淋巴细胞）与骨髓瘤细胞（具有无限增殖能力），在聚乙二醇（PEG）等融合剂的作用下进行细胞融合，形成杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞同时具备了 B 淋巴细胞产生特异性抗体的能力和骨髓瘤细胞无限增殖的特性。

筛选阳性杂交瘤细胞：利用酶联免疫吸附测定（ELISA）等方法，对融合后的细胞进行筛选，找出能够产生抗毒死蜱单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。一般是将毒死蜱抗原包被在酶标板上，加入细胞培养上清液，若能与抗原特异性结合则为阳性细胞。

克隆化培养：对筛选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养，得到单个细胞的克隆，以确保产生的抗体具有高度均一性。常用的克隆化方法有限稀释法和软琼脂平板法等。经过多次克隆化培养和筛选，获得稳定分泌高亲和力毒死蜱单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

单克隆抗体的大量制备：筛选出稳定的杂交瘤细胞株后，可通过体内培养和体外培养两种方法大量制备单克隆抗体。体内培养是将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔内，使其在小鼠体内形成腹水，然后从腹水中获取单克隆抗体；体外培养则是利用细胞培养技术，在生物反应器中培养杂交瘤细胞，收集培养液获得单克隆抗体。

优点

高度特异性：只针对毒死蜱的特定抗原表位起作用，与其他农药或化合物的交叉反应率极低，能够准确识别和检测毒死蜱，大大提高了检测的准确性和可靠性，减少假阳性结果的出现。

高度均一性：由单一的杂交瘤细胞克隆产生，其抗体的分子结构、氨基酸序列和生物学特性等高度一致，在检测中表现出稳定的性能，批间差异小，可重复性好，有利于标准化检测方法的建立和质量控制。

可大量制备：通过细胞培养技术或动物体内培养，可以大量生产单克隆抗体，满足不同领域对抗体的需求，为大规模的检测和分析提供了充足的试剂来源。

应用

残留检测：是农药残留免疫分析的核心试剂，基于其建立的 ELISA、胶体金免疫层析试纸条、免疫传感器等方法，可快速、灵敏地检测农产品、环境水样、土壤等样品中毒死蜱的残留量，为农产品质量安全监管和环境保护提供有力的技术支持。例如，ELISA 试剂盒可在实验室对大量样品进行定量检测，胶体金试纸条则可用于现场快速定性筛查。

免疫亲和层析：将毒死蜱单克隆抗体固定在层析介质上，制备成免疫亲和柱。当含有毒死蜱的样品通过亲和柱时，毒死蜱会与抗体特异性结合，而其他杂质则被洗脱，从而实现对样品中毒死蜱的分离和富集，为后续的分析检测提供纯净的样品，提高检测的灵敏度和准确性，常用于复杂样品前处理。

免疫组织化学：可用于研究毒死蜱在生物体内的分布和代谢情况。通过将单克隆抗体与组织切片或细胞样品进行孵育，利用抗体与毒死蜱的特异性结合，再通过免疫标记技术（如荧光标记、酶标记等）显示出毒死蜱在组织细胞中的位置和分布，有助于深入了解毒死蜱对生物体的作用机制和毒理学效应。