鼠抗鱼小清蛋白单克隆抗体

Monoclonal antibody against fish albumin

鱼小清蛋白（Parvalbumin）是鱼类中主要的过敏原之一，属于一类低分子量钙结合蛋白，广泛存在于多种海水和淡水鱼类中。作为抗原，它能引发人体免疫系统的异常反应，导致鱼类过敏。

一、基本特性

分子结构

分子量约为 10-12 kDa，具有稳定的三维结构，含 α- 螺旋和钙结合结构域（EF-hand 基序）。

结构中的钙结合位点使其对热、酸、酶（如胃蛋白酶）具有较强抗性，即使经过烹饪或加工，仍可能保留致敏性。

种属分布

广泛存在于硬骨鱼类（如鳕鱼、鲈鱼、鲑鱼、鲤鱼等），不同鱼类中的小清蛋白同源性较高（60%-80%），可能导致交叉过敏。

软骨鱼类（如鲨鱼、鳐鱼）中含量较低，过敏风险相对较小。

致敏机制

作为主要过敏原，可通过 IgE 介导的 Ⅰ 型超敏反应引发过敏症状，如皮疹、呼吸困难、呕吐等，严重时可导致过敏性休克。

其致敏性与结构稳定性密切相关，即使在消化过程中不易被降解，仍能以完整抗原形式触发免疫反应。

二、抗原表位与交叉反应

抗原表位

线性表位：由特定氨基酸序列（如保守区域）构成，是 IgE 识别的主要位点。

构象表位：依赖三维空间结构，需完整蛋白结构才能被识别，加热可能破坏部分构象表位，但线性表位仍保留致敏性。

交叉反应

种间交叉反应：不同鱼类的小清蛋白因序列相似性高，可能引发 “泛鱼类过敏”，即对一种鱼类过敏者可能对多种鱼类过敏。

与其他过敏原的交叉反应：少数情况下可能与植物钙结合蛋白（如花粉中的钙调蛋白）发生交叉反应，称为 “交叉致敏”（如乳胶 - 水果 - 鱼类综合征）。

三、过敏流行病学

人群患病率：全球鱼类过敏的患病率约为 0.2%-2.5%，在沿海地区和鱼类消费高的地区更为常见。

高危人群：儿童（尤其是特应性体质者）和成年人均可发病，且过敏症状可能随暴露次数加重。

临床症状：

速发型过敏反应（接触后数分钟至 2 小时内）：皮肤瘙痒、荨麻疹、流涕、哮喘、胃肠道不适等。

迟发型反应（数小时后）：较为罕见，可能与其他过敏原（如肌肉蛋白）相关。

四、检测与诊断

1. 体外检测

血清特异性 IgE 检测：

使用纯化的鱼小清蛋白作为抗原，通过放射免疫法（RAST）或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清中的 sIgE 水平。

商品化试剂盒（如 Thermo Fisher、Phadia 的 ImmunoCAP）已广泛应用。

免疫印迹（Western Blot）：用于分析患者血清对不同鱼类小清蛋白的特异性反应，辅助判断交叉过敏范围。

2. 体内检测

皮肤点刺试验（SPT）：将鱼类提取物或纯化小清蛋白溶液滴于皮肤，刺破后观察风团反应，灵敏度较高但需注意严重过敏风险。

口服激发试验（OFC）：在严格医疗监护下进行，是诊断鱼类过敏的金标准，但仅用于必要时（如检测结果不明确时）。

3. 分子诊断

基于小清蛋白基因序列（如编码 β- 小清蛋白的基因）开发特异性引物，用于鱼类物种鉴定和过敏原溯源。

鱼小清蛋白抗体（Anti-Parvalbumin Antibody）是免疫系统针对鱼类过敏原 ** 鱼小清蛋白（Parvalbumin）** 产生的特异性抗体，主要参与 IgE 介导的 Ⅰ 型超敏反应（速发型过敏）。

一、抗体类型与功能

1. 主要抗体类型

• IgE 抗体

• 核心作用：鱼小清蛋白特异性 IgE 抗体是鱼类过敏的关键介质。当机体首次接触鱼小清蛋白后，免疫系统会产生 IgE 并结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面。再次接触过敏原时，IgE 交联触发细胞释放组胺、白三烯等炎症介质，引发过敏症状（如皮疹、哮喘、休克等）。

• 检测意义：血清中特异性 IgE（sIgE）水平是鱼类过敏诊断的重要指标，可通过 ELISA、ImmunoCAP 等方法定量检测。

• IgG 抗体

• 部分研究认为 IgG 可通过竞争性结合过敏原，阻断 IgE 介导的过敏反应（“封闭抗体” 作用）；

• 也可能参与其他类型免疫反应（如 Ⅲ 型超敏反应），但在鱼类过敏中作用尚不明确。

• 免疫应答角色：部分情况下（如长期低剂量暴露或免疫治疗后），机体可能产生特异性 IgG 抗体，其功能存在争议：

2. 抗体的特异性与交叉反应

• 种属特异性：

• 不同鱼类的小清蛋白（如鳕鱼 Gad m 1、鲑鱼 Sal s 1）存在氨基酸序列差异，抗体可能针对特定鱼类亚型产生特异性识别。

• 交叉反应性：

• 由于小清蛋白在硬骨鱼类中同源性高（60%~80%），抗体常呈现 “泛鱼类” 交叉反应，即对一种鱼类过敏者可能对多种鱼类产生抗体应答。

二、抗体检测在鱼类过敏诊断中的应用

1. 体外检测方法

检测方法	原理	应用场景	优势	局限性
血清 sIgE 检测	利用纯化鱼小清蛋白抗原捕获血清中的 IgE，通过酶或荧光标记定量	初筛鱼类过敏、评估过敏严重程度	无创、可批量检测	可能受其他过敏原干扰（假阳性）
免疫印迹（WB）	将鱼类提取物电泳分离后，与患者血清孵育，检测抗体对特定分子量蛋白的识别	分析抗体对不同鱼类小清蛋白的特异性	可区分单一或多种鱼类过敏	操作复杂，需专业实验室
组胺释放试验	检测抗体与过敏原结合后诱导肥大细胞释放组胺的能力	验证抗体功能性应答（而非仅结合能力）	直接反映过敏反应机制	需分离患者细胞，临床应用受限

2. 临床诊断流程

1. 病史采集：明确过敏症状与鱼类摄入的关联。

2. 皮肤点刺试验（SPT）：使用鱼类提取物或纯化小清蛋白进行皮试，观察风团反应（IgE 介导的即时反应）。

3. 血清 sIgE 检测：确认特异性抗体存在，结合临床症状判断过敏状态。

4. 口服激发试验（OFC）：金标准，但仅用于检测结果矛盾或需明确交叉过敏范围时。

三、抗体在过敏机制研究中的应用

1. 表位 Mapping（表位定位）

• 通过合成小清蛋白的多肽片段（如线性表位），筛选与抗体结合的关键区域，解析致敏机制：

• 线性表位：由连续氨基酸序列构成（如 Gad m 1 的 11-23 位氨基酸），耐消化，是 IgE 识别的主要位点。

• 构象表位：依赖三维结构（如钙结合域），加热可能破坏其与抗体的结合能力。

2. 交叉反应机制研究

• 利用抗体检测不同鱼类小清蛋白的交叉反应性，揭示 “泛鱼类过敏” 的分子基础。例如：

• 硬骨鱼类小清蛋白的保守 EF-hand 结构域可能是交叉反应的主要靶点。

• 软骨鱼类（如鲨鱼）小清蛋白因序列差异大，与硬骨鱼类抗体的交叉反应率低。

3. 免疫治疗监测

• 在特异性免疫治疗（如鱼小清蛋白肽段免疫疗法）中，抗体水平变化可作为疗效评估指标：

• 治疗初期 IgE 可能短暂升高，随后逐渐下降；

• IgG4 水平升高常被视为免疫耐受诱导的标志。

四、抗体的制备与应用场景

1. 单克隆抗体（mAb）制备

• 方法：通过杂交瘤技术，将免疫小鼠的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌特异性抗体的细胞株。

• 应用：

• 食品检测：开发 ELISA 试剂盒，检测食品中残留的鱼小清蛋白（如加工食品中的鱼类成分过敏原）。

• 基础研究：作为工具抗体，用于免疫组化、流式细胞术等，定位鱼类组织中的小清蛋白分布。

2. 多克隆抗体（pAb）制备

• 方法：免疫动物（如兔子、山羊）产生混合抗体，识别抗原的多个表位。

• 应用：

• 过敏原标准化：用于制备鱼类过敏原提取物的标准品，确保检测试剂的一致性。

• 交叉反应研究：因识别多表位，更适合模拟人体复杂的抗体应答模式。

五、与其他过敏原抗体的差异

对比维度	鱼小清蛋白抗体	其他鱼类过敏原抗体（如肌浆蛋白、 tropomyosin）
过敏原类型	钙结合蛋白（分子量 10-12 kDa）	肌浆蛋白（如肌动蛋白）、热带鱼过敏原（如原肌球蛋白）
致敏机制	主要通过 IgE 介导速发型过敏	部分通过 IgE，部分通过非 IgE 途径（如 T 细胞介导）
热稳定性	高（钙结合域耐热处理）	部分不耐热（如某些肌浆蛋白）
交叉反应性	硬骨鱼类间高度交叉反应	种间差异较大，交叉反应率低
临床意义	硬骨鱼类过敏的主要标志物	热带鱼过敏或迟发型反应的辅助指标