鼠抗小麦醇溶蛋白单克隆抗体

Mouse monoclonal antibody against Wheat Gliadin

鼠抗小麦醇溶蛋白单克隆抗体是通过杂交瘤技术制备的，以小麦醇溶蛋白（Gliadin）为抗原的特异性单克隆抗体。小麦醇溶蛋白是小麦面筋蛋白的主要成分之一（占面筋蛋白约 40%–50%），与乳糜泻（Celiac Disease）、小麦过敏等免疫性疾病密切相关。该抗体具有高度特异性，能识别醇溶蛋白的特定抗原表位，广泛应用于食品检测、免疫学研究及疾病机制探索。

基本特性

1. 来源与制备

抗原特性：

小麦醇溶蛋白是一组富含脯氨酸和谷氨酰胺的蛋白质，根据电泳迁移率分为 α/β、γ、ω 等亚型，其中 α- 醇溶蛋白含免疫原性肽段（如 DQ2/DQ8 限制性表位），可触发乳糜泻患者的肠道免疫反应。

制备流程：

免疫小鼠：以纯化的醇溶蛋白（如 α- 醇溶蛋白）或重组肽段免疫小鼠，诱导 B 淋巴细胞产生特异性抗体。

细胞融合与筛选：融合脾细胞与骨髓瘤细胞，通过 ELISA 或免疫印迹筛选能分泌抗醇溶蛋白抗体的杂交瘤细胞克隆。

抗体生产：通过体外培养或小鼠腹腔注射获得腹水型抗体，经纯化（如 Protein A/G 亲和层析）提高纯度。

2. 免疫学特性

抗体类型：通常为 IgG 类，部分克隆可能为 IgM 或 IgA（需根据具体产品确认）。

特异性：

识别醇溶蛋白特定亚型（如 α、γ）或保守表位，与麦谷蛋白（Glutenin）、其他谷物蛋白（如燕麦、大米）无交叉反应（需验证）。

部分抗体针对乳糜泻相关表位（如 α- 醇溶蛋白的 33-mer 肽段），可用于模拟肠道免疫反应研究。

亲和力：高亲和力克隆的 Kₐ可达 10⁹ M⁻¹ 以上，适用于低丰度抗原检测。

主要应用

1. 食品检测与质量控制

无麸质食品认证：

检测食品中残留的醇溶蛋白（阈值通常≤20 mg/kg），如燕麦制品、加工谷物等，确保 “无麸质” 标签的准确性。

检测方法：

ELISA 试剂盒：基于鼠抗醇溶蛋白单克隆抗体的双抗体夹心法（如 RIDASCREEN® Gliadin），操作简便，适合批量检测。

免疫层析试纸条：用于现场快速筛查（如食品加工过程中的污染监控）。

2. 乳糜泻与小麦过敏研究

机制研究：

分析醇溶蛋白诱导肠黏膜免疫细胞（如 T 细胞、树突状细胞）活化的分子机制。

研究抗醇溶蛋白抗体与肠道屏障功能损伤（如 zonulin 通路激活）的关联。

动物模型应用：

在乳糜泻小鼠模型（如 HLA-DQ8 转基因小鼠）中，检测肠道组织或血清中的醇溶蛋白特异性抗体（IgG/IgA）。

评估益生菌、酶制剂（如谷氨酰胺转氨酶）对醇溶蛋白免疫原性的降解效果。

3. 分子生物学与疫苗开发

抗原表位 mapping：

通过抗体筛选醇溶蛋白的 B 细胞表位，为疫苗设计（如阻断 T 细胞识别的肽段疫苗）提供靶点。

重组蛋白研究：

验证重组醇溶蛋白变体的免疫原性（如去免疫原性突变体的功能评价）。

使用注意事项

1. 抗体特异性验证

交叉反应测试：

需确认抗体是否与其他谷物蛋白（如黑麦 Secalin、大麦 Hordein）发生交叉反应，避免食品检测假阳性。

乳糜泻研究中，优先选择针对 α- 醇溶蛋白 33-mer 肽段的抗体（如克隆号 9G4）。

样本预处理：

食品样本需经盐酸或酶解处理，释放醇溶蛋白（其溶于 70% 乙醇，不溶于水）。

2. 实验条件优化

稀释梯度：

ELISA 中抗体工作浓度通常为 0.1–1 μg/mL，需通过方阵滴定确定最佳稀释度。

对照设置：

阳性对照：已知含醇溶蛋白的小麦粉提取物；阴性对照：无麸质食品基质（如玉米粉）。

3. 保存与操作

保存条件：

原液：-20℃避光保存，避免反复冻融；分装为小剂量（如 50–100 μL）以减少损耗。

工作液：含 0.05% 叠氮化钠的 PBS 缓冲液，4℃保存不超过 2 周。

生物安全：

腹水型抗体可能含小鼠病原体，需按生物危害等级处理废弃物。