出血性大肠杆菌单克隆抗体；出血性大肠杆菌抗体；大肠杆菌抗体；0157:H7-McAb
出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型，它可引起出血性肠炎等严重疾病：
生物学特性
出血性大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，具鞭毛，能运动，无芽孢，兼性厌氧，在普通培养基上生长良好。其最适生长温度为 37℃，最适 pH 值为 7.2 - 7.4。
致病机制
产生毒素：出血性大肠杆菌能产生志贺样毒素（SLT），该毒素具有细胞毒、肠毒素和神经毒素活性，可损伤肠黏膜细胞，导致肠道出血和溃疡。
黏附与定植：通过菌毛等黏附因子与肠上皮细胞特异性结合，在肠道内定植并大量繁殖，进而引发感染。
所致疾病
出血性肠炎：主要症状为突发性腹痛、腹泻，初期多为水样便，随后可转为血便，常伴有恶心、呕吐。
溶血性尿毒综合征（HUS）：是出血性大肠杆菌感染最严重的并发症，多见于儿童。除了有出血性肠炎的表现外，还会出现溶血性贫血、血小板减少和急性肾衰竭等症状，严重时可危及生命。
传播途径
食物传播：是最主要的传播途径，常见于食用被污染的肉类（尤其是未煮熟的牛肉）、牛奶、蔬菜、水果等。如 2011 年德国发生的出血性大肠杆菌疫情，就是由食用被污染的豆芽引起的。
水源传播：饮用受污染的水也可感染出血性大肠杆菌，如在一些卫生条件较差的地区，水源易被含有病菌的粪便污染。
接触传播：人与人之间的密切接触，如照顾患者、接触患者排泄物等，也可能导致病菌传播。在幼儿园、学校等人员密集场所，容易发生这种传播。
诊断方法
细菌培养：采集患者粪便或其他临床样本，接种于选择性培养基，如麦康凯培养基、伊红美蓝培养基等，根据细菌的生长特征和生化反应进行初步鉴定。
血清学检测：采用血清凝集试验等方法，检测患者血清中针对出血性大肠杆菌的特异性抗体，有助于疾病的诊断和流行病学调查。
分子生物学检测：常用的方法有聚合酶链反应（PCR），可检测出血性大肠杆菌的特异性基因，如志贺样毒素基因、黏附因子基因等，具有快速、准确的特点。
出血性大肠杆菌单克隆抗体是一种针对出血性大肠杆菌特定抗原的高度特异性抗体，在疾病诊断、治疗和研究等方面具有重要作用。
制备
通常采用细胞融合技术来制备出血性大肠杆菌单克隆抗体。首先，用出血性大肠杆菌的特定抗原免疫小鼠，使小鼠体内的免疫系统产生针对该抗原的 B 淋巴细胞。然后，将这些 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。通过筛选和克隆化培养，获得能够稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，最后从细胞培养上清液或小鼠腹水等中获取单克隆抗体。
技术参数
特异性：能高度特异性地识别出血性大肠杆菌的特定抗原，与其他类型的大肠杆菌或其他细菌的交叉反应极低，可准确检测出出血性大肠杆菌。
亲和力：具有较高的亲和力，能紧密结合目标抗原，即使在抗原浓度较低的情况下也能有效结合，从而保证检测的灵敏度。一般亲和力常数在 10⁻⁸ - 10⁻¹²mol/L 之间。
效价：效价是衡量抗体浓度和活性的指标。出血性大肠杆菌单克隆抗体的效价通常较高，在 ELISA 等检测方法中，可稀释至较高倍数仍能保持良好的检测效果，一般效价可达 1:10000 以上。
在检测中的应用
免疫层析法：将单克隆抗体固定在硝酸纤维素膜等载体上，利用抗原 - 抗体特异性结合原理，当样本中的出血性大肠杆菌抗原与抗体相遇时，会形成免疫复合物，通过显色反应在试纸条上显示出特定的条带，可快速定性检测样本中是否存在出血性大肠杆菌，常用于现场快速筛查和临床初步诊断。
ELISA：是一种常用的定量检测方法。将单克隆抗体包被在酶标板上，加入待检测样本，若样本中含有出血性大肠杆菌抗原，抗原会与抗体结合，再加入酶标记的二抗和底物，通过酶催化底物显色，根据吸光度值来定量分析样本中的抗原含量，适用于大规模样本的检测和实验室精确诊断。
免疫荧光法：将单克隆抗体标记上荧光素，与样本中的出血性大肠杆菌抗原结合后，在荧光显微镜下观察，可直观地看到发荧光的细菌，不仅能检测细菌的存在，还能对其进行定位和形态观察，有助于进一步了解细菌在组织或细胞中的分布情况。
在治疗中的应用前景
出血性大肠杆菌单克隆抗体可特异性地结合细菌表面抗原，阻断细菌与宿主细胞的黏附，从而抑制细菌在体内的定植和扩散。同时，抗体还可激活机体的免疫防御机制，如补体系统和吞噬细胞，增强对细菌的杀伤和清除作用。此外，针对出血性大肠杆菌毒素的单克隆抗体，能够中和毒素活性，减轻毒素对机体组织细胞的损伤，有望成为治疗出血性大肠杆菌感染相关疾病的有效手段。
优势与局限性
优势：具有高度的特异性和灵敏度，能够准确检测出微量的出血性大肠杆菌抗原，有助于疾病的早期诊断；可以大规模生产，保证试剂的稳定性和一致性；在治疗方面，为开发新型特异性治疗药物提供了可能，有望降低抗生素的使用，减少耐药性的产生。
局限性：单克隆抗体的制备过程复杂，成本较高，导致检测试剂和治疗药物价格昂贵；实际应用中，可能受到样本中其他物质的干扰，影响检测结果的准确性；对于一些变异的出血性大肠杆菌菌株，单克隆抗体的识别能力可能会受到影响，需要不断研发新的抗体来应对菌株的多样性。
多种因素会影响出血性大肠杆菌单克隆抗体的检测效果，包括样本特性、检测环境条件、单克隆抗体本身质量以及检测方法和操作等方面：
样本因素
样本类型：不同类型的样本，如粪便、血液、食品等，其成分和基质复杂程度不同。例如，粪便中含有大量的杂质、细菌和其他生物物质，可能会干扰抗体与抗原的结合，需要进行适当的预处理，否则会影响检测效果。
样本保存与处理：样本的保存条件和时间对检测结果有重要影响。如果样本保存不当，如在高温、高湿度环境下存放时间过长，或者保存温度不稳定，可能导致出血性大肠杆菌抗原的降解、变性或浓度变化，从而影响单克隆抗体对其的识别和检测。
环境因素
温度：温度对抗体 - 抗原结合反应有显著影响。一般来说，检测过程需要在特定的温度范围内进行，温度过高或过低都会影响抗体的活性和抗原 - 抗体复合物的稳定性。例如，在 ELISA 检测中，孵育温度偏离最佳温度（通常为 37℃左右）可能导致结合力下降，影响检测的灵敏度。
pH 值：pH 值也是影响抗体 - 抗原反应的重要因素。不同的单克隆抗体有其适宜的 pH 范围，过酸或过碱的环境可能会改变抗体和抗原的电荷性质，影响它们之间的结合亲和力，甚至导致抗体或抗原变性失活。
单克隆抗体因素
特异性和亲和力：单克隆抗体的特异性和亲和力直接决定了检测效果。特异性高的抗体能够准确识别出血性大肠杆菌的目标抗原，减少与其他无关抗原的交叉反应；亲和力强的抗体则能在较低抗原浓度下实现有效结合，提高检测的灵敏度。如果抗体的特异性或亲和力不足，可能出现假阳性或假阴性结果。
质量和稳定性：单克隆抗体的质量包括其纯度、活性和稳定性等方面。高质量的抗体应具有较高的纯度，不含杂质和其他干扰物质。同时，抗体的稳定性要好，在储存和使用过程中不易降解或失活。如果抗体质量不佳，如受到污染、保存不当导致活性降低，会严重影响检测结果的准确性和可靠性。
检测方法与操作因素
检测方法的局限性：不同的检测方法具有不同的灵敏度和特异性。例如，免疫层析法虽然操作简便、快速，但灵敏度可能相对较低，对于低浓度抗原的检测效果可能不如 ELISA 等方法。此外，每种检测方法都有其适用范围和局限性，选择不当会影响检测结果。
操作误差：检测过程中的操作步骤是否规范、准确对结果影响很大。例如，加样量不准确、孵育时间和温度控制不当、洗涤不充分等操作失误，都可能导致检测结果出现偏差。在 ELISA 检测中，加样量的微小差异可能会导致吸光度值的明显变化，从而影响对样本中抗原含量的判断。
抗体类型：鼠源IgG
该抗体可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。
亚 型：IgG2a，IgM，IgG2b，IgG1
来源：BALB/C小鼠
免疫原： 出血性大肠杆菌抗原
可用于免疫荧光，WB,ELISA,等科研项目
规格：1mg/瓶，纯度>95%
推荐使用浓度： 胶体金： 5微克/ml金液；
【工作效价】
ELISA法：1：500~5000
免疫印迹：1：200~5000。
免疫组化：1：20~500。
标记二抗的使用浓度：国产1:100-1:500；进口1:1000-1:5000
具体效价以产品标签为准，Z佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
纯化方式：亲和层析纯化
来源： balb/c小鼠
缓冲液：0.01PBS+保护剂
【常见问题】
1. 包被抗体或抗原不适，易产生阳性值较小，或产生变异，即跳管现象。
2. 用抗血清不纯化，或纯化程度太低的抗体包被，则阳性值较小，或没有阳性梯度。
3. 封闭不好或标记物过浓可产生对照值较高。
【保存条件】-20℃保存，保持期为24个月.
