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抗犬腺病毒1型单克隆抗体;抗犬腺病毒2型单克隆抗体
    发布时间: 2023-06-06 16:09    
抗犬腺病毒1型单克隆抗体;抗犬腺病毒2型单克隆抗体

    抗犬腺病毒1型单克隆抗体;抗犬腺病毒2型单克隆抗体;犬腺病毒抗体;犬CAV抗体
    Monoclonal antibodies and  virus

    犬腺病毒主要蛋白概述:
    六邻体蛋白(Hexon):腺病毒主要的中和抗原表位位于六邻体蛋白的 Loop1、Loop2 上。目前对于人腺病毒的该蛋白研究较多,而对于犬传染性肝炎病毒(即犬腺病毒 Ⅰ 型)的研究相对较少。参考 Genebank 发表的基因序列设计引物,提取犬传染性肝炎病毒基因组 DNA,分别 PCR 扩增六邻体蛋白的 Loop1、Loop2 基因片段,用 T4 酶连接在一起,克隆入原核表达载体 pET28a 中。测序显示保存病毒分离株 Loop1 与 CLL 株、RI261 株和 Toronto A26/61 株核苷酸序列同源性分别为 100%、100% 和 83.8%;Loop2 与 CLL 株、RI261 株和 Toronto A26/61 株核苷酸序列同源性分别为 88.1%、88.1% 和 99.3%,推导的氨基酸序列同源性分别为 93.6%、93.6% 和 98.6%。转化 BL21 工程菌,实现了重组 Loop 蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分子量约为 36kDa,并且利用镍柱纯化重组蛋白,纯度达 95% 以上。用重组蛋白免疫 BALB/c 小鼠后,以间接 ELISA 法测定血清抗病毒抗体效价达 1:320 以上,western blot 鉴定免疫血清与犬传染性肝炎病毒特异性结合8。
    纤维蛋白(Fiber):是犬腺病毒 Ⅰ 型(CAdV-1)的结构蛋白之一,介导病毒粒子与宿主细胞上的柯萨奇病毒和腺病毒受体结合。成功分离出 CAdV-1-JL2021 株,与在意大利流行的 CAdV-1 株最为相似。CAdV-1-JL2021 和 CAdV-2-AC_000020.1 中发现了负选择和重组的发生。其亚细胞定位在宿主细胞膜。CAdV-1-JL2021 Fiber(ON164651)有 6 个糖基化位点和 107 个磷酸化位点,与 CAdV-2-AC_000020.1 Fiber 一样,通过粘附受体介导病毒粒子与宿主细胞的附着。CAdV-1-JL2021 和 CAdV-2-AC_000020.1 的 Fiber 三级结构不同,但它们具有相同的柯萨奇病毒和腺病毒受体。“VATTSPTLTFAYPLIKNNNH” 被预测为潜在的 CAdV-1 B 细胞线性表位。MHC-I 结合肽 “KLGVKPTTY” 在 CAdV-1-JL2021 和 CAdV-2-AC_000020.1 Fiber 中均存在,这对于设计犬腺病毒疫苗很有帮助

    亲和力参数
    抗体的亲和力是指抗体与抗原结合的强度。对于犬腺病毒抗体而言,其亲和力参数受到多种因素的影响。
    在研究中发现,通过特定的技术手段可以提高犬腺病毒抗体的亲和力。例如,利用细菌展示技术构建抗犬细小病毒单链抗体文库,通过流式细胞术筛选出高亲和力的单链抗体。在抗犬细小病毒同源单链抗体的研究中,通过免疫本动物源动物,在获得高价抗体的同时,避免了传统单克隆抗体的免疫排斥现象,为获得高亲和力抗体提供了一种新的途径。
    此外,有研究通过识别犬腺病毒的特定表位,利用计算预测平台来设计突变体抗体,以改善抗原结合,从而提高抗体的亲和力。
    特异性参数
    犬腺病毒抗体的特异性是指其对犬腺病毒的识别和结合的专一性。
    有研究针对犬腺病毒不同类型制备了单克隆抗体,并通过病毒中和试验、间接荧光抗体试验等方法对其特异性进行了评估。例如,针对犬腺病毒 1 型(CAV-1)和犬腺病毒 2 型(CAV-2)制备的单克隆抗体,通过体外病毒中和(VN) assays 和间接荧光抗体(IFA) tests 来检验其特异性7。其中,部分单克隆抗体对特定类型的犬腺病毒具有高度的特异性,能够区分不同类型的犬腺病毒。
    同时,通过对犬腺病毒不同抗原蛋白的研究,也可以提高抗体的特异性。例如,有研究识别了犬腺病毒 2 型(CAdV-2)特异性的两个线性中和表位,这两个表位位于犬腺病毒 2 的六邻体蛋白(Hex)上,通过免疫沉淀、Western blot 和蛋白质光谱分析等方法确定了中和性单克隆抗体识别的抗原蛋白,从而提高了抗体的特异性。
    稳定性参数
    犬腺病毒抗体的稳定性参数包括在不同条件下的保存稳定性、在体内的存留时间等。
    在疫苗研究中,对狂犬糖蛋白 - 犬 2 型腺病毒重组疫苗的安全性评价中,检测了疫苗在免疫犬体内的分布、存留时间、排泄规律等,间接反映了犬腺病毒抗体的稳定性。结果表明,重组疫苗在免疫犬大肠和小肠短暂存留,在犬粪便中短期存在,且高倍剂量免疫受试犬无急性、亚急性和慢性毒性作用,无致畸作用,子代犬均发育正常,说明该重组疫苗诱导产生的抗体具有一定的稳定性9。
    另外,有研究评估了血清抗体滴度随时间的变化,以间接反映抗体的稳定性。例如,研究评估了血清抗体滴度对犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒 2(CAV2)的影响,结果表明 CAV2 和 CPV 滴度随时间的增加而降低,说明抗体的稳定性可能会随着时间的推移而下降。但同时也发现,在不同的生活阶段和暴露风险下,抗体的稳定性也会有所不同

抗犬腺病毒1型单克隆抗体;抗犬腺病毒2型单克隆抗体;犬腺病毒抗体;犬CAV抗体

品牌:PhyCell/费雪

规格:1mg

该抗体可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。

可用于免疫荧光,WB,ELISA,等科研项目

纯度>95%

推荐使用浓度: 胶体金: 5微克/ml金液;

 ELISA: 1:2000-1:5000

WB及免疫组化,免疫荧光:1:50-1:500

标记二抗的使用浓度:国产1:100-1:500;进口1:1000-1:5000

纯化方式:亲和层析纯化

来源: balb/c小鼠

缓冲液:0.01PBS+保护剂

储存:-20℃,避免反复冻融