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犬瘟热病毒(CDV)抗体
    发布时间: 2023-06-04 11:33    
犬瘟热病毒(CDV)抗体

犬瘟热病毒(CDV)抗体 (Canine Distemper Virus)

犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)是一种对犬科动物具有高度传染性和致病性的病毒:

病毒特性

分类:属于副黏病毒科麻疹病毒属。

形态结构:病毒粒子呈球形,直径为 150 - 300 纳米。其核衣壳为螺旋对称结构,由单股负链 RNA 与核蛋白、磷蛋白和大蛋白组成,外面包裹着一层来自宿主细胞膜的包膜,包膜上镶嵌着两种糖蛋白,分别是血凝素(H)蛋白和融合(F)蛋白,这两种蛋白在病毒的感染过程中起着关键作用。

理化特性:CDV 对热、干燥和一般消毒剂敏感,在 50 - 60℃下 30 分钟即可被灭活,在室温下存活时间较短。但在低温下可长期存活,如在 - 70℃可保存数年。

流行病学

宿主范围:主要感染犬科动物,如犬、狼、狐狸等,也可感染鼬科动物(如貂、水獭)和浣熊科动物(如浣熊、小熊猫)等。

传播途径:主要通过呼吸道和消化道传播。病犬的鼻液、唾液、尿液、粪便等分泌物和排泄物中含有大量病毒,健康犬通过接触这些污染物,或者吸入含有病毒的飞沫、气溶胶而感染。此外,母犬感染后可经胎盘垂直传播给胎儿。

流行特点:犬瘟热一年四季均可发生,但以冬春季节多发。幼犬由于免疫系统尚未发育完全,对 CDV 特别易感,发病率和死亡率都较高。

发病机制

病毒首先通过呼吸道或消化道黏膜侵入机体,在局部淋巴结内进行复制,随后进入血液循环,形成第一次病毒血症。

病毒随血液扩散到全身各组织器官,如脾、胸腺、骨髓等免疫器官以及呼吸道、消化道、神经系统等,在这些组织细胞中进一步复制繁殖,导致细胞损伤和功能障碍,引起相应的临床症状。

当机体免疫系统被激活后,会产生特异性抗体和细胞免疫应答来清除病毒。但在一些情况下,病毒可能会逃避机体的免疫清除,在神经组织中持续存在,引起神经系统症状,如抽搐、共济失调等。

临床症状

早期症状:与感冒相似,表现为发热、精神沉郁、食欲不振、咳嗽、流涕、流泪等。

中期症状:病情逐渐加重,出现呕吐、腹泻、眼鼻分泌物增多且变为脓性,皮肤可能出现红疹、水疱等。

后期症状:神经症状明显,如肌肉抽搐、癫痫发作、转圈、共济失调、后肢麻痹等。部分病犬还可能出现角膜混浊、溃疡等眼部症状。

诊断方法

临床诊断:根据病犬的临床症状、流行病学特点进行初步诊断,但犬瘟热的症状与其他一些疾病有相似之处,仅靠临床症状难以确诊。

实验室诊断:常用的方法包括病毒分离、血清学检测(如 ELISA 检测抗体、免疫荧光检测抗原)、分子生物学检测(如 RT - PCR 检测病毒核酸)等,这些方法可以准确地诊断犬瘟热。

犬瘟热病毒单克隆抗体(CDV McAb)是利用细胞融合技术,将犬瘟热病毒免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞融合,

制备出能分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞株,从中培养、筛选出特异性的杂交瘤细胞,接种SPF级BALB/c。

小鼠,从腹腔中提取的高效高特异性抗体即为治疗和预防犬瘟热的单克隆抗体制剂。由于单克隆抗体的分子量小;特异性极强,

可迅速到达病毒侵染的组织和细胞杀灭病毒,

犬瘟热病毒单克隆抗体可通过淋巴和血液循环系统快速到达病毒侵染的组织和细胞,抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制,

 达到杀灭犬体内病毒的目的, 同时又可参与犬体内的其它抗病毒保护机制,如免疫调理,

抗体依赖细胞介导的细胞毒作用和抗体依赖补体介导的细胞毒作用,从而进一步激活犬体内的细胞免疫系统,

发挥更大的杀灭病毒的作用。由于犬瘟热病毒单克隆抗体分子量小,特异性极强,可以部分通过血脑屏障,进入神经细胞, 

因而对出现神经症状的病犬也有一定的治疗作用。

 


犬瘟热病毒单克隆抗体技术参数通常包括以下方面:

抗体的特异性

能特异性识别犬瘟热病毒的特定抗原表位,与其他病毒或犬体内的正常蛋白等无交叉反应,确保其在检测和治疗中只针对犬瘟热病毒发挥作用。例如,通过免疫印迹试验等方法验证,该单克隆抗体只与犬瘟热病毒的核蛋白、血凝素蛋白等特异性抗原条带结合,而不与犬细小病毒、犬腺病毒等其他相关病毒的抗原发生反应。

抗体的亲和力

亲和力是指抗体与抗原结合的紧密程度,通常用平衡解离常数(KD)来表示。犬瘟热病毒单克隆抗体的 KD 值一般在 10⁻⁷ - 10⁻¹²mol/L 之间,亲和力越高,KD 值越低,表明抗体与犬瘟热病毒抗原的结合能力越强,在体内或体外能够更有效地捕捉和中和病毒。例如,采用表面等离子共振技术测定某犬瘟热病毒单克隆抗体的 KD 值为 5×10⁻¹⁰mol/L,说明其对相应抗原具有较高的亲和力。

抗体的效价

效价反映了抗体在血清或培养液中的相对含量。一般通过酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法来测定,以能检测到特异性反应的最高稀释倍数表示。犬瘟热病毒单克隆抗体的效价通常在 1:1000 - 1:10000 甚至更高,高的效价意味着在较低的抗体浓度下就能发挥作用,有利于其在实际应用中的效果。例如,某单克隆抗体腹水经 ELISA 检测,其效价达到 1:5000,说明该抗体具有较高的含量和活性。

抗体的类型和亚类

犬瘟热病毒单克隆抗体一般为 IgG 类,根据重链恒定区的不同,又可分为 IgG1、IgG2a、IgG2b 等亚类。不同亚类的抗体在体内的功能和特性有所差异,例如 IgG1 在激活补体和介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)方面可能具有不同的效率。通过血清学方法或基因测序等技术可以确定单克隆抗体的类型和亚类。

抗体的稳定性

在不同的储存条件和使用环境下,抗体需要保持稳定的活性。犬瘟热病毒单克隆抗体在 4℃可稳定保存数周,在 - 20℃或更低温度下可长期保存,反复冻融次数一般不超过 5 次,以免影响其活性。同时,在模拟体内生理条件下,如不同的 pH 值和离子强度环境中,抗体也应能保持其结构和功能的完整性,通常在 pH 6 - 8 的范围内稳定性较好。

中和活性

这是衡量单克隆抗体在治疗应用中最重要的参数之一,指抗体能够中和犬瘟热病毒感染性的能力。通过细胞病变抑制试验(CPE)、病毒蚀斑减少试验等方法来测定,一般用中和指数或中和滴度来表示。

可用于免疫荧光,WB,ELISA,等科研项目

规格:1mg/瓶,纯度>99%

推荐使用浓度: 胶体金: 5微克/ml金液;

 ELISA: 1:5 000-1 0000

WB及免疫组化,免疫荧光:1:50-1:500

标记二抗的使用浓度:国产1:100-1:500;进口1:1000-1:5000

纯化方式:亲和层析纯化

来源: balb/c小鼠

缓冲液:0.01PBS+保护剂

储存:-20℃,避免反复冻融