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猪伪狂犬(PRV)gB蛋白,猪伪狂犬gD蛋白,猪伪狂犬gE蛋白,猪伪狂犬DB蛋白
    发布时间: 2023-05-26 16:42    
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病毒特性参数

病毒类型:猪伪狂犬属于疱疹病毒科 α - 疱疹病毒亚科,为双链 DNA 病毒。

病毒形态:病毒粒子呈球形,直径约 150 - 200 纳米,核衣壳为二十面体对称结构,有囊膜,囊膜表面有纤突。

诊断技术参数

ELISA 检测

敏感性:能检测出低至纳克级别的病毒抗原或抗体,一般可检测到血清中抗体滴度为 1:10 - 1:20 的水平。

特异性:与猪瘟、猪蓝耳病等其他常见猪病的抗体无交叉反应,特异性较高,可达 95% 以上。

检测时间:整个检测过程通常在 2 - 3 小时内完成。

PCR 检测

敏感性:可检测到样本中少至几个拷贝的病毒 DNA,比 ELISA 更为敏感。

特异性:针对猪伪狂犬的特定基因序列设计引物,特异性强,可准确区分猪伪狂犬与其他病毒,特异性可达 98% - 100%。

检测时间:包括核酸提取、PCR 扩增和结果分析,一般 3 - 4 小时可出结果。

病毒分离培养

细胞系选择:常用猪肾细胞系(PK - 15)、猪睾丸细胞系(ST)等,病毒在这些细胞上可引起典型的细胞病变效应(CPE),如细胞变圆、聚集、脱落等。

培养条件:需在含 10% - 20% 胎牛血清的 DMEM 或 MEM 培养基中,37℃、5% 二氧化碳条件下培养。

检测时间:一般 3 - 7 天可观察到明显的细胞病变,若要获得足够的病毒量用于进一步检测或研究,可能需要更长时间。

疫苗免疫参数

免疫剂量:不同厂家生产的疫苗免疫剂量有所不同,一般仔猪肌肉注射 0.5 - 1 毫升,成年猪 1 - 2 毫升。

免疫程序:仔猪通常在 3 - 4 周龄首免,间隔 3 - 4 周后进行二免;后备母猪配种前 1 个月免疫一次,产前 1 个月加强免疫一次;经产母猪在每次产前 1 个月免疫一次。

免疫保护期:疫苗免疫后,一般 7 - 14 天开始产生抗体,能提供 6 - 12 个月的有效保护,但在实际生产中,由于猪群的个体差异、母源抗体干扰等因素,保护期可能会有所变化,需定期监测抗体水平并适时加强免疫。

流行病学参数

易感动物:猪是猪伪狂犬的自然宿主,不同年龄、性别、品种的猪均易感,其中仔猪最为敏感,发病率和死亡率都很高。此外,牛、羊、犬、猫等动物也可感染发病。

传播途径:主要通过接触传播,包括直接接触感染猪的分泌物、排泄物,如鼻液、唾液、尿液、粪便等,也可通过间接接触被病毒污染的饲料、饮水、器具等传播。另外,呼吸道飞沫传播和垂直传播(母猪经胎盘感染胎儿)在猪伪狂犬的传播中也起着重要作用。

流行季节:猪伪狂犬一年四季均可发生,但在冬春季节较为常见,可能与猪群密集饲养、通风不良以及寒冷应激等因素有关。

猪伪狂犬(PRV)抗原的技术参数主要涉及以下方面:

抗原类型

天然抗原:通常从感染 PRV 的猪组织或细胞培养物中提取,包含病毒的多种蛋白成分,如 gB、gC、gD、gE 等糖蛋白抗原,以及核蛋白等。这些抗原能较好地模拟病毒在体内的真实状态,激发机体产生全面的免疫反应,但提取过程较为复杂,且可能含有杂质。

重组抗原:利用基因工程技术将 PRV 的特定抗原基因克隆到表达载体中,在大肠杆菌、酵母或昆虫细胞等表达系统中表达。常见的重组抗原包括 gE、gB 蛋白的部分或全长片段等。重组抗原具有纯度高、产量大、批间差异小等优点,且可根据需要选择特定的免疫原性区域进行表达,提高抗原的免疫效果。

合成肽抗原:根据 PRV 抗原蛋白的氨基酸序列,人工合成具有免疫原性的短肽。合成肽抗原具有高度的特异性,可针对病毒的关键抗原表位进行设计,但免疫原性相对较弱,通常需要与载体蛋白偶联后才能诱导有效的免疫反应。

抗原纯度

对于用于疫苗生产的 PRV 抗原,纯度要求较高,一般需达到 90% 以上,以减少杂质对免疫效果的影响和可能产生的不良反应。例如,通过亲和层析、离子交换层析等纯化方法获得的重组 gE 抗原,纯度可达到 95% 甚至更高,能有效提高疫苗的质量和稳定性。

用于诊断试剂的抗原,纯度也需在一定水平之上,通常要求不低于 80%,以保证检测的准确性和特异性。较低纯度的抗原可能会导致非特异性反应,出现假阳性或假阴性结果。

抗原活性

抗原活性是指抗原能够诱导机体产生特异性免疫反应的能力。PRV 抗原的活性与其空间结构、表面抗原表位的暴露程度等因素有关。一般通过动物免疫实验、细胞免疫实验或体外结合实验等来评估抗原活性。

例如,将 PRV 抗原免疫小鼠后,检测小鼠血清中针对该抗原的特异性抗体水平,以及抗体对病毒的中和活性,以此来判断抗原的免疫原性和活性。对于诊断用抗原,可通过检测其与已知抗体的结合能力来评估活性,如采用 ELISA 方法,观察抗原与抗体结合后的吸光度值,吸光度值越高,表明抗原与抗体的结合能力越强,抗原活性越好。

抗原稳定性

PRV 抗原的稳定性对于其在疫苗和诊断试剂中的应用至关重要。抗原应在一定的储存条件下保持其结构和活性的相对稳定。一般来说,PRV 抗原在低温(如 - 20℃或 - 80℃)下可保存较长时间,而在常温或较高温度下,抗原的稳定性会下降,可能发生变性、降解或聚集等现象,导致抗原活性降低。