磺胺喹恶啉单克隆抗体（38E1细胞株）；磺胺喹恶啉偶联抗原

英文名称：Sulfaquinoxaline（SQX）

效价高，灵敏度好，间接竞争ELISA的IC50值约为1ppb。

磺胺喹恶啉单克隆抗体（38E1细胞株）；磺胺喹噁啉单克隆抗体；磺胺喹恶啉抗体； Sulfaquinoxaline（SQX）抗体；磺胺喹恶啉抗原

型与结构

1. 核心组成

载体蛋白：常用牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）或钥孔血蓝蛋白（KLH），用于增强免疫原性。

半抗原：磺胺喹恶啉（Sulfaquinoxaline，SQX）分子，通过化学偶联反应与载体蛋白结合，形成抗原复合物。

偶联位点：SQX 分子中的 氨基（-NH₂） 或 羧基（-COOH） 是主要偶联位点，通常通过重氮化反应（针对氨基）或碳二亚胺法（EDC/NHS，针对羧基）实现偶联。

2. 结构示意图（概念性）

plaintext

SQX分子（半抗原） + 载体蛋白（如BSA） → SQX-BSA抗原

                     ↓

                     偶联臂（如琥珀酸酐 linker）可能引入以增加空间位阻

二、制备方法与流程

1. 重氮化法（适用于氨基偶联）

半抗原活化：

SQX 溶解于 0.1 M 盐酸，冰浴条件下滴加 NaNO₂溶液（浓度 0.5 M），反应 10 分钟生成重氮盐。

载体蛋白准备：

BSA 溶解于 0.1 M 碳酸盐缓冲液（pH 9.0），浓度 5~10 mg/mL。

偶联反应：

将重氮盐逐滴加入 BSA 溶液，4℃搅拌反应 2 小时，期间用 NaOH 维持 pH 8.5~9.0。

终止与纯化：

加入少量尿素破坏剩余重氮盐，通过透析（蒸馏水或 PBS，MWCO 14,000 Da）去除小分子杂质，冻干后保存于 - 20℃。

2. EDC/NHS 法（适用于羧基偶联）

半抗原活化：

SQX 若含羧基（需预先引入，如通过酯化反应），加入 EDC（10 mg/mL）和 NHS（5 mg/mL），室温活化 30 分钟。

偶联反应：

活化后的 SQX 与 BSA（5 mg/mL）在 pH 7.4 的 PBS 中混合，室温振荡反应 4 小时。

纯化：

过 Sephadex G-25 柱分离抗原与游离半抗原，收集主峰冻干。

3. 关键控制参数

指标    控制范围    检测方法

偶联比    10~20 个 SQX 分子 / 蛋白分子    UV 分光光度法

溶解度    ≥1 mg/mL（PBS, pH 7.4）    肉眼观察 / 浊度检测

免疫原性    免疫小鼠后抗体效价≥1:50,000    间接 ELISA

三、主要应用场景

1. 免疫检测试剂开发

ELISA 试剂盒：作为包被抗原（如 SQX-BSA）用于竞争法检测，或作为免疫原制备单克隆 / 多克隆抗体。

检测对象：动物源性食品（肉类、蜂蜜、水产品）中 SQX 残留，国家标准限量通常为 50~100 μg/kg。

灵敏度：基于该抗原的 ELISA 方法检测限（LOD）可达 1~5 μg/kg。

胶体金试纸条：SQX-BSA 偶联物吸附于硝酸纤维素膜作为检测线，用于现场快速筛查。

磺胺喹恶啉单克隆抗体（38E1 细胞株） 的相关信息整理：

一、基本概念

1. 磺胺喹恶啉（Sulfaquinoxaline, SQX）

属于 磺胺类抗菌药物，常用于畜禽养殖中预防和治疗球虫病、细菌感染等。

因其残留可能对人体健康（如过敏反应、造血系统影响）和环境造成风险，被列为食品动物中需严格监控的兽药残留。

2. 单克隆抗体（Monoclonal Antibody, mAb）

通过 杂交瘤技术 制备，由单一 B 细胞克隆产生，具有 高度特异性和均一性。

38E1 细胞株 是筛选获得的特定杂交瘤细胞，可稳定分泌针对磺胺喹恶啉的单克隆抗体。

二、磺胺喹恶啉单克隆抗体（38E1 细胞株）的特性

1. 特异性

仅识别磺胺喹恶啉分子结构中的 抗原决定簇，与其他磺胺类药物（如磺胺甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶等）的交叉反应率低，适用于高特异性检测。

2. 灵敏度

检测下限（LOD）通常可达 ng/mL（ppb）级别，满足国内外食品安全标准对兽药残留的限量要求（如欧盟、中国 GB 31658 系列标准）。

3. 制备流程

免疫原制备：将磺胺喹恶啉与载体蛋白（如牛血清白蛋白 BSA）偶联，诱导动物（如小鼠）产生免疫应答。

细胞融合：取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞（38E1 株）。

单克隆化与扩增：通过有限稀释法克隆化培养，确保细胞株稳定性，随后在体外培养或小鼠腹腔中生产抗体。

4. 应用形式

纯化抗体：通过 Protein A/G 亲和层析等方法纯化，用于构建检测试剂盒（如 ELISA、胶体金试纸条）。

标记抗体：与酶（如 HRP）、荧光素或纳米颗粒偶联，用于免疫检测技术中的信号放大。

三、主要应用场景

1. 食品安全检测

兽药残留筛查：用于动物源性食品（如肉类、蛋类、乳制品）中磺胺喹恶啉残留的快速检测。

检测方法：

ELISA 试剂盒：操作简便，适合批量样品初筛。

化学发光免疫分析（CLIA）：灵敏度更高，适用于低浓度残留确证。

2. 环境监测

检测水体、土壤中磺胺喹恶啉的残留，评估其对生态系统的潜在影响。

3. 科学研究

作为工具抗体用于免疫组化、免疫印迹等实验，研究磺胺类药物在生物体内的分布与代谢。

四、关键技术参数（示例）

参数    典型值

交叉反应率（CR）    对磺胺喹恶啉：100%

对其他磺胺类：＜5%

灵敏度（IC₅₀）    0.5-2 ng/mL

抗体亚型    IgG1（小鼠来源常见亚型）

保存条件    -20℃避光保存，避免反复冻融

有效期    1-2 年（未开封）

五、注意事项

交叉反应验证：使用前需确认抗体对目标 analyte 的特异性，避免因结构类似物（如其他磺胺类药物）导致假阳性。

实验优化：不同检测平台（如 ELISA vs. 试纸条）需优化抗体工作浓度、孵育时间等条件。

生物安全：操作中涉及的动物细胞株、抗体溶液需遵循生物安全规范，避免污染。